Agar Sangre

μ- NOTA 6

By Víctor Deroncelé

El agar sangre es un medio de cultivo utilizado para el aislamiento de numerosos microorganismos.  Al ser suplementado con sangre ovina, permite el crecimiento de microorganismos nutricionalmente exigentes y la clara visualización de reacciones de hemólisis.

• El agar sangre se presenta como un medio basal que se puede utilizar como medio de crecimiento general. El medio basal puede ser Agar Columbia, Agar soja tripticasa, agar nutriente, agar infusión cerebro corazón, agar Müeller Hinton, agar Thayer Martin, agar Brucella, agar Campylobacter,
• El agar sangre es un excelente medio para el cultivo de bacterias exigentes que requieren nutrientes particulares y no crecen profusamente en medios generales como el agar nutritivo.
• Se prepara añadiendo un 5% de sangre desfibrinada de mamíferos (humanos, ovinos o equinos) a los medios basales esterilizados en autoclave.
• Es un medio enriquecido que favorece el crecimiento de bacterias exigentes aunque el crecimiento de algunas bacterias como Neisseria y Haemophilus no es satisfactorio en este medio.
• Para favorecer el crecimiento de las bacterias inhibidas en el agar sangre (Neisseria y Haemophilus), los “inhibidores” en la sangre deben desactivarse calentando el agar sangre. El agar sangre calentado se convierte en agar chocolate.
• El agar sangre permite observar la hemólisis causada por las bacterias en crecimiento, y esto puede usarse para la identificación del organismo.
• El agar sangre clásico debe ser incluido para el sembrado de la mayoría de las muestras clínicas recibidas en el laboratorio; a excepción de las muestras de heces en el que no es útil, a menos que se prepare con ciertas modificaciones.
• Para aislar microorganismos Gram positivos en forma selectiva, puede agregarse colistina y ácido nalidíxico. Este medio suplementado con estos antibióticos es conocido como HV o CNA y se utiliza especialmente para el aislamiento de Gardnerella vaginalis.

El agar sangre es un medio enriquecido, diferencial y no selectivo.

Enriquecido porque tiene entre 5 -10 % de sangre sobre una base de agar y esto permite el crecimiento la mayoría de las bacterias cultivables.

Ese crecimiento ocurre sin restricción; por este motivo es no selectivo. Sin embargo, si a este medio se le adicionan compuestos que impidan el crecimiento de algunos microorganismos y favorezca el de otros, se vuelve selectivo. Es el caso si se adicionan ciertos tipos de antibióticos o antifúngicos.

Diferencial porque permite distinguir la capacidad hemolítica de los microorganismos.

La hemólisis es la lisis de los glóbulos rojos de la sangre por la acción de enzimas extracelulares producidas por ciertas especies bacterianas. Las enzimas extracelulares producidas por estas bacterias se denominan hemolisinas y se difunden radialmente hacia el exterior de las colonias, provocando la lisis total o parcial de los glóbulos rojos.

En el agar sangre pueden observarse cuatro tipos diferentes de hemólisis:

1. La hemólisis alfa…definida como una decoloración gris verdosa o pardusca alrededor de la colonia y es el resultado de la lisis parcial de los glóbulos rojos.

Durante la α-hemólisis, el H₂O₂ producido por la bacteria hace que la hemoglobina presente en los glóbulos rojos del medio se convierta en metahemoglobina.

Algunas de las especies α-hemolíticas son parte de la microbiota humana normal, pero algunas especies como Streptococcus pneumoniae causan neumonía y otras infecciones graves.

Los estreptococos del grupo viridans son α-hemolíticos.

2. La beta-hemólisis es la lisis completa de los glóbulos rojos, lo que da como resultado una zona incolora alrededor y debajo de la colonia. Streptococcus pyogenes y Streptococcus agalactiae son beta-hemolíticos.

La máxima actividad de hemolisinas (las hemolisinas sensibles al oxígeno (SLO) y las estables al oxígeno (SLS)) de los estreptococos del grupo A (S. pyogenes,) se observa solo en condiciones anaeróbicas, por lo que las colonias beta-hemolíticas se observan mejor cuando las placas se incuban con una mayor concentración de CO₂.

Otros ejemplos de microrganismos beta-hemolíticos incluyen a Staphylococcus aureus, Listeria monocytogenes y Bacillus cereus.

3. La hemólisis gamma también se denomina no hemólisis, ya que no se produce lisis de los glóbulos rojos.

Como resultado, no se observa cambio de coloración ni zona de hemólisis debajo o alrededor de las colonias.

Especies como Neisseria meningiditis son no hemolíticas o gamma-hemolíticas.

Ejemplo de bacterias γ-hemolíticos: algunas cepas de Streptococcus del grupo D (Streptococcus bovis y Enterococcus faecalis).

4. La hemólisis Alfa prima (a\’): se caracteriza por una pequeña zona de eritrocitos intactos adyacente a la colonia bacteriana, con una zona de lisis completa de glóbulos rojos que rodea la zona de eritrocitos intactos. Este tipo de hemólisis podría confundirse con la β-hemólisis debido a que se observa  una zona clara alrededor de las colonias.

La doble zona de hemólisis se observa también en  bacterias  como Clostridium perfringens y Aeromonas hydrophilia .

Tipos de hemólisis

• Alfa (α): hemólisis parcial, que deja algunos glóbulos intactos cerca de la colonia y un halo verdoso alrededor de la colonia.
• Alfa prima (α\’): hemólisis parcial, que deja algunos glóbulos intactos cerca de la colonia, pero no deja glóbulos en una zona un poco más alejada. A ojo desnudo parece una hemólisis total pues un halo verdoso mu pegado a la colonia, suele confundirse con parte de la misma.
• Beta (β): hemólisis total, que no deja glóbulos alrededor de la colonia, quedando el medio total ente transparente.
• Gamma (γ): ausencia de hemólisis.

En la siguiente tabla algunos ejemplos de bacterias de interés clínico crecidas en agar sangre.