Kligler’s Iron Agar (KIA)

μ- NOTA 27

By Víctor Deroncelé

El Agar Hierro Kligler (KIA) es un medio de cultivo ampliamente utilizado en microbiología, especialmente en el análisis de alimentos, para diferenciar bacterias de la familia Enterobacteriaceae según su capacidad para fermentar carbohidratos (glucosa y lactosa) y producir gas o ácido sulfhídrico (H₂S). Este medio aprovecha las diferencias bioquímicas y enzimáticas entre especies bacterianas para identificar su capacidad de metabolizar distintos sustratos.

Uso

El test de KIA es crucial para identificar enterobacterias en muestras clínicas y no clínicas, evaluando su habilidad para fermentar azúcares y producir H₂S. Este medio es particularmente útil en microbiología de alimentos para la identificación de patógenos como Salmonella y Shigella.

Principio del Test de KIA

Cada bacteria tiene una capacidad diferente para metabolizar glucosa, lactosa y compuestos de azufre, lo que genera productos finales específicos según el tipo de microorganismo. A continuación se detalla cómo ocurre este proceso:

1. Fermentación de la glucosa: Las bacterias que pueden fermentar glucosa producen ácidos metabólicos, lo que reduce el pH del medio y cambia su color de rojo a amarillo, tanto en la superficie inclinada (slant) como en el fondo (butt). Sin embargo, la cantidad de glucosa en el medio es baja, por lo que se agota rápidamente. Este cambio de color indica un pH ácido en ambas áreas al inicio de la fermentación.
2. Metabolismo oxidativo de peptonas: Si las bacterias no pueden fermentar lactosa, después de agotar la glucosa, comenzarán a metabolizar las peptonas en la superficie. Esto ocurre solo en la parte aeróbica del tubo (slant), donde el oxígeno está presente. Este metabolismo genera compuestos alcalinos, haciendo que el pH vuelva a ser alcalino y el color del slant cambie nuevamente a rojo. Sin embargo, en el fondo del tubo (donde el ambiente es anaeróbico), no se produce oxidación de las peptonas, por lo que el color permanece amarillo debido a la acidez residual de la fermentación de glucosa. Esto genera un resultado \»Rojo/Amarillo\» o K/A.
3. Fermentación de lactosa: Las bacterias capaces de fermentar lactosa generan una mayor cantidad de ácido, que mantiene el pH bajo tanto en el slant como en el butt. En este caso, el medio se mantiene completamente amarillo, ya que la fermentación de lactosa produce ácido suficiente para evitar la reoxidación de la peptona en la superficie. Este resultado se registra como \»Amarillo/Amarillo\» o A/A.
4. Bacterias no fermentadoras: Si las bacterias no pueden fermentar ni glucosa ni lactosa, el medio permanecerá rojo en ambas áreas (slant y butt), indicando un ambiente alcalino en todo el tubo, resultado conocido como K/K.
5. Producción de gas: Durante la fermentación de carbohidratos, algunas bacterias liberan gas, lo que se puede observar en forma de burbujas o grietas en el medio. Esta producción de gas es un indicador adicional del metabolismo bacteriano.
6. Producción de H₂S: Algunas bacterias, como Salmonella, pueden metabolizar el tiosulfato de sodio presente en el medio, liberando gas H₂S. Este gas reacciona con los iones de hierro (Fe³⁺), formando un precipitado insoluble de sulfuro de hierro (FeS) de color negro, lo que indica claramente la producción de H₂S.

El medio KIA contiene componentes esenciales para evaluar estas diferencias bioquímicas:

Durante la prueba, si las bacterias fermentan glucosa, el ácido generado cambia el color del medio a amarillo. La lactosa se fermenta de forma más prolongada, manteniendo el medio completamente amarillo si ocurre esta fermentación. En caso de que se produzca H₂S, el medio desarrollará una coloración negra, resultado de la combinación de H₂S con los iones de hierro. La presencia de gas también es detectable por la formación de burbujas o grietas en el medio.

Procedimiento

1. Usar una aguja de inoculación para tomar una colonia aislada.
2. Insertar la aguja en el centro del medio hasta casi el fondo del tubo (zona de fondo o \»butt\»).
3. Estriar la superficie del medio inclinado (slant) con la misma aguja.
4. Incubar el tubo a 35°C durante 18 a 48 horas.
5. Observar los cambios de color en la superficie y el fondo del medio, así como la posible producción de gas y precipitados negros de H₂S.

Interpretación de Resultados

Ejemplos de Resultados Comunes

Comparación con el Test TSI

El test de KIA es similar al Triple Sugar Iron (TSI), pero este último contiene un tercer azúcar, la sacarosa, lo que dificulta la diferenciación entre bacterias que fermentan lactosa y sacarosa. En cambio, el test de KIA se enfoca únicamente en glucosa y lactosa, lo que lo convierte en una herramienta más específica para identificar enterobacterias.